第一章:实时荧光定量PCR概述
一、实时荧光定量PCR的概念
实时荧光定量PCR(Real-time PCR)是一种先进的分子生物学技术,能够通过实时监测荧光信号的积累,记录整个PCR反应的过程。最终,通过CT值和标准曲线进行未知模板的定量分析。
二、实时荧光定量PCR的原理
A. 化学原理
该技术通过将产物DNA分子转化为荧光信号来实现检测,荧光值的测定可直接反映出产物DNA分子的量。
B. 数学原理
采用循环次数“n”(CT值)来计算初始DNA的量,这是实时荧光定量PCR的数学基础。
三、实时荧光定量PCR方法的选择
进行实时荧光定量PCR时,适当的方法选择至关重要。不同实验需求可能要求采用不同的策略和检测配置,以确保数据的准确性和可靠性。
四、实时荧光定量PCR的优势
相较于其他基因定量方法,实时荧光定量PCR具有多方面的优势:
- 能够实时监控PCR反应的进展,为研究提供动态信息。
- 具有更大的检测范围,能够精准定量样本中的起始量。
- 在单管中便可实现扩增和检测,无需PCR后处理,简化了实验流程。
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