尊龙凯时人生就博提供的哺乳动物蛋白提取试剂盒，旨在简化科研人员在蛋白质研究中的应用。该试剂盒包含以下成分：

试剂盒成分

• 5X Buffer: 10 ml
• 5X NaCl: 10 ml
• 5X SDS: 10 ml
• 5X DOC: 10 ml
• 5X NP-40: 10 ml
• 20X PBS: 10 ml
• Protease Inhibitor Cocktail: 0.5 ml

保存条件

该试剂盒可在常温下保存，唯一例外是Protease Inhibitor Cocktail，需保存在-20°C。其保质期为24个月，确保每次使用的有效性。

提取步骤

1. 准备

根据5X Buffer，5X NaCl，5X SDS，5X DOC和5X NP-40以1:1:1:1:1的比例（v/v）配制细胞裂解缓冲液。每1 ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20 mg组织中的蛋白质。在使用前需加入10 μl的Protease Inhibitor Cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：首先去除细胞中的生长培养基，使用PBS缓冲液冲洗细胞两次。然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞放入冰袋中，在摇床上孵育30分钟，期间需阶段性重悬细胞，最后将裂解液刮取并收集。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬并洗涤细胞两次，随后在4°C下离心并去除上清液。最后将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），在冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切成小块，先用PBS冲洗两次。接着加入细胞裂解缓冲液（5~20 mg组织/ml），转移样品至预冷微量匀浆器中，并在冰上均匀化组织30~50次，此步骤对靶蛋白的功能完整性至关重要。

3. 离心

在4°C下，以12,000xg离心10分钟以沉淀细胞碎片，或以100,000xg高速离心45分钟来制备蛋白质溶液。

4. 保存

将含蛋白质的上清液移至冷冻管中，并在冰上保存以便立即使用，或者将蛋白质溶液保存在-70°C进行长期保存。

利用尊龙凯时人生就博的高效蛋白提取试剂盒，科研人员能够便捷、快速地获取高质量的蛋白质样品，用于进一步的生物医学研究。