本试剂盒专门设计用于科学研究目的,严禁用于医学诊断。本文将介绍人肺部活化调节趋化因子(PARC) Elisa试剂盒的使用说明及其检测原理。
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被的adropin(AD)抗体微孔中,依次加入样本、标准品以及HRP标记的检测抗体,经过一定的温育和彻底洗涤后,使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的催化下,会转化为蓝色,随后在酸性条件下变为最终的黄色。颜色的深浅与样本中adropin(AD)的浓度呈正相关。最终,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:采用不含热原和内毒素的试管,避免操作过程中任何细胞刺激。收集血液后,在3000转的条件下离心10分钟,迅速分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,随后在3000转下离心30分钟并取上清。
3. 细胞上清液:在3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合并捣碎,随后在3000转下离心10分钟,取上清。
5. 保存:若样品未能及时检测,请按单次使用量分装并于-20℃冷冻,避免反复冻融,解冻时应在室温下并确保样品充分均匀解冻。
操作注意事项
在使用本试剂盒之前,请确保准备好相应的实验材料。标准品浓度依次为S0-S5:0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液稀释:用蒸馏水按1:20的比例稀释,即1份20×洗涤缓冲液配19份蒸馏水。
结果判断
为了评估实验结果,需要绘制标准曲线:在Excel中,以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制线性回归曲线,并根据曲线方程计算各样本的浓度值。
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