无需纯化设备和低温环境,并具备简单的操作流程,能够显著节约设备和人力成本。
背景概述:mRNA技术作为一种新兴的平台技术,在预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗、免疫治疗、蛋白替代和基因编辑等多个领域得到广泛应用。在体外转录过程中的mRNA合成,除了获得目标mRNA外,尚会产生反应酶(如T7RNA聚合酶、无机焦磷酸酶)、NTP、DNA模板、盐离子及副产物(如dsRNA和截断RNA片段)等杂质。这些杂质不仅影响mRNA的准确定量,还可能降低蛋白翻译效率,并引发免疫反应。因此,在体外转录之后,必须通过纯化手段,将目标mRNA从IVT混合物中分离出来,以提高产品纯度和完整性,从而确保其安全性和有效性。
常规的mRNA纯化方法主要包括氯化锂(LiCl)沉淀法、磁珠纯化法、硫酸铵沉淀法和亲和层析纯化等。其中,沉淀法和磁珠法操作相对简单且快速,适合早期研发应用;而在工业生产中,层析纯化成为主要的手段,但此过程通常需要专业的设备。
尊龙凯时人生就博推出的轻量级mRNA亲和层析纯化试剂盒,无需依赖专业设备,操作简便,仅需30分钟即可完成样本纯化,且可获得高纯度和低NTP残留的目标产品,适用于各种下游实验。
1. 氯化锂(LiCl)沉淀法
该方法利用锂离子在特定pH值下能减少RNA分子之间的同电性排斥,从而促进RNA分子的聚集形成沉淀。具体操作包括:将反应后的IVT产物与LiCl溶液混合,存放于-20°C下离心,收集沉淀后用70%乙醇清洗,再用RNase-free水或缓冲液溶解沉淀。不过,由于残留的锂盐可能具有毒性,因此在大规模生产中会引发较高的能源成本。
2. 磁珠纯化法
该方法采用Oligo(dT)磁珠及羧基磁珠来纯化mRNA。Oligo(dT)磁珠通过与带有Poly(A)尾的mRNA特异性结合,并利用磁力将其目标RNA与非特异性杂质分离。羧基磁珠则利用mRNA在酸性条件下的负电荷与羧基的静电作用进行分离。尽管该方法能有效去除杂质,但在某些条件下可能对mRNA完整性产生不良影响。
3. 硫酸铵沉淀法
硫酸铵沉淀法利用目标mRNA与杂质的溶解度差异,选择性沉淀mRNA,并具有较高的溶解度和生物安全性。本方法无需特殊设备,为IVT体系或后续工艺中的快速分离mRNA提供了理想选择。
4. 亲和层析法
传统的亲和层析通常需要专业设备,而尊龙凯时人生就博的新型亲和层析纯化试剂盒则简化了这一过程。该试剂盒在30分钟内即可完成样本纯化,并确保目标mRNA的高质量和快速获得。该方法不仅免除特殊设备的需求,同时也适应不同起始量的RNA样品。
总结来说,尊龙凯时人生就博提供的轻量级mRNA亲和层析纯化试剂盒,不仅操作简便,能够显著节约设备和人力成本,还能确保高纯度的mRNA合成,满足各种生物医疗实验的需求,为mRNA的工业生产带来了新的便利。